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酵母蛋白表达系统

酵母蛋白表达系统

Protein Expression in Yeast

毕赤酵母表达系统介绍

毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是近年来发展迅速、应用广泛的一种真核表达系统。它是甲醇营养型酵母菌,有两个乙醇氧化酶(Alcohol oxidase, AOX)编码基因AOX1和AOX2,两种序列相似,AOX1基因严格受甲醇诱导和调控。当甲醇为唯一碳源时,AOX1启动子可被甲醇诱导,启动乙醇氧化酶的表达,从而用甲醇进行代谢,含AOX1启动子的质粒可用来促进编码外源蛋白的目的基因的表达。

表达菌株特点

GS115:AOX1和AOX2基因都正常表达AOX蛋白(乙醇氧化酶),甲醇的利用率高,接近于野生型,属于甲醇快速利用型(Mut+)

KM71:AOX1基因被大部分剔除,只能利用AOX2为AOX编码,甲醇的利用速率变慢,表现为甲醇慢利用型(Muts)

外源基因的整合方式不同会导致表达菌株的表型不同:

菌株表型

酵母蛋白表达系统;Protein Expression in Yeast

常用表达载体及筛选标记

载体信息

酵母蛋白表达系统;Protein Expression in Yeast


信号肽

对于胞外表达的蛋白除了可以用载体自带的信号肽,还有以下信号肽可供选择:

信号肽序列

酵母蛋白表达系统;Protein Expression in Yeast

毕赤酵母表达系统的优势

1. 含有特有的强有力的AOX(醇氧化酶基因)启动子,用甲醇可严格地调控外源基因的表达。

2. 培养成本低,产物易分离,毕赤酵母所用发酵培养基成本合理,一般碳源为甘油或葡萄糖及甲醇,其余为无机盐,培养基中不含蛋白,有利于下游产品分离纯化。

3. 外源蛋白基因遗传稳定,外源基因能以高拷贝数整合到毕赤酵母基因组中,不易丢失并能得到高表达菌株。

4. 作为真核表达系统,毕赤酵母具有真核生物的亚细胞结构,具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻译后修饰加工功能。

艾柏森生物酵母表达系统的优势

1. 具备完备的毕赤酵母表达平台,可以根据蛋白特性或客户的需求设计不同的实验方案;

2. 具有高通量的筛选平台,可以快速有效的得到最佳表达条件;

3. 具有大规模发酵生产能力

服务组合

酵母蛋白表达系统;Protein Expression in Yeast

经典案例

表达载体pPIC3.5K(胞内表达),目的蛋白32.49KD(理论值)

表达菌株:GS115/KM71

诱导条件:甲醇浓度0.5%/1%,诱导时间24h/48/72h

结果分析:从SDS-PAGE胶图中可以看到,目的蛋白(糖基化后40KDa左右)有明显表达,其中GS115-5#-24h,0.5%甲醇,GS115-2#-48h,1%甲醇,GS115-3#-48h,01%甲醇,KM71-1#-72h,1%甲醇,都有很明显的目的条带,目的蛋白成功表达。


酵母蛋白表达系统;Protein Expression in Yeast


酵母蛋白表达系统;Protein Expression in Yeast



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