艾柏森生物提供重组人源化抗体稳定过表达细胞株构建服务。流程如下—— 1. 载体构建&病毒包装 将人源化的抗体基因转接到慢病毒载体上,然后对质粒表达进行检测,通过包装获得过表达目的基因的慢病毒质粒。慢病毒载体系统的包装成分与载体成分一起转染293细胞进行包装;24至48小时后,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,浓缩后进行滴度测试。 2. 细胞转染 常用的真核表达载体的抗性标志物有嘌呤霉素(Puromycin)、潮霉素(Hygromycin)和新霉素(Neomycin)。首先确定Puromycin/G418的筛选浓度和病毒转染浓度,然后病毒悬液转染细胞24h,Puromycin/G418筛选稳转株,ELISA和WB法鉴定。 3. 单克隆化 使用Molecular ClonePix2系统,高通量、自动化的筛选出100-200个高水平分泌克隆,并从中挑选最佳10个高产克隆,进行下一步的稳定性测试。 4. 细胞系稳定筛选 细胞株多次传代数次后,就有可能会出现遗传不稳定性。我们挑选出最优的10个克隆,进行10次传代后,qPCR和WB法检测细胞株的稳定性。最后我们提供序列及载体报告, 3株表达最好的细胞株,表达分析、稳定性测试报告以及详细的稳定细胞株构建报告。 |
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