常规兔源多克隆抗体定制服务常规小鼠源多克隆抗体定制服务常规大鼠源多克隆抗体定制服务常规鸡源多克隆抗体制备服务快速抗体制备服务多克隆抗体制备服务小鼠源单克隆抗体定制服务大鼠源单克隆抗体定制服务仓鼠源单克隆抗体定制服务兔子单克隆抗体制备鸡单克隆抗体制备猴子单克隆抗体制备犬单克隆抗体制备单克隆抗体/杂交瘤细胞定制服务免疫组化保证性抗体制备转录后特殊修饰结构识别抗体制备抗专一亚型抗体制备配体模拟激活性抗体制备捕获\报告配对抗体制备功能阻遏\专一型抗抗体制备特殊功能抗体制备服务膜蛋白抗体制备服务半抗原抗体制备服务脂质体免疫抗体制备服务自体抗原抗体制备服务特殊性质抗原抗体制备服务基于全细胞抗原呈递的抗体制备方案基于传统单克隆抗体制备方案G蛋白偶联受体抗体制备服务抗离子通道蛋白抗体制备服务抗膜蛋白抗体制备专题噬菌体展示文库构建工程化骨架蛋白文库构建限制性多肽文库构建噬菌体展示文库筛选内化抗体筛选热稳定性scFv/Fab筛选蛋白酶底物筛选单域抗体库构建全人源单抗制备噬菌体展示和抗体文库服务双特异性纳米抗体制备单域(纳米)抗体库构建纳米抗体亲和力成熟服务人源/人源化纳米抗体制备DNA免疫技术制备膜蛋白纳米抗体抗血脑屏障纳米抗体制备纳米抗体服务细菌展示服务核糖体展示服务酵母展示服务体外展示&其他服务酵母双杂交筛选服务哺乳动物细胞双杂交服务胞内抗体制备服务双杂交服务原位杂交ISH荧光原位杂交FISH原位杂交服务X-射线晶体学通过肽库方法通过LC-MS法通过三维电镜方法基于生物信息学预测单克隆抗体表位作图抗体测序服务表面等离子共振服务(SPR)等温滴定量热法服务(ITC)双偏振极化干涉测量服务(DPI)差示扫描量热法服务(DSC)免疫原性评价抗体亲和力检测抗体鉴定抗体分析服务二价和双特异性scFv/Fab服务嵌合抗原受体(CAR)构建服务嵌合IgG构建scFV/Fab构建双可变区免疫球蛋白制备服务定制半胱氨酸改型抗体超长CDR3s牛抗体制备非猴抗体的硅烷化抗体稳定性改进抗体亲和力成熟抗体人源化服务抗体经典化服务人源抗体骆驼化服务人源抗体初始化服务抗体工程服务双特异性T细胞衔接器(BiTE)Fab-scFv融合蛋白KNODBS-INTO-HOLE技术杂交瘤细胞系双特异性抗体抗体和蛋白标记抗体生物素化Fab PEG化抗体偶联药物纳米金标记抗体糖纳米粒标记抗体标记服务酶和蛋白定向进化突变库构建服务蛋白工程服务抗体人源化亲和力成熟人源化牛超长CDR3抗体服务人源化纳米抗体制备人源化猴单抗制备人源/人源化抗体服务蛋白/抗体偶联服务生物素化服务寡聚糖生物偶联寡核苷酸生物偶联表面锚定服务脂质体偶联服务PEG修饰服务合成聚合物修饰生物偶联服务重组IgG制备scFv/Fab制备双特异性抗体制备抗体和蛋白纯化服务重组抗体制备服务稳定细胞系构建定制细胞裂解液稳定细胞系开发cGMP生产治疗性抗体和蛋白生产大规模发酵服务cGMP生产大肠杆菌蛋白表达系统枯草芽孢杆菌表达系统酵母蛋白表达系统昆虫杆状病毒表达系统哺乳动物细胞蛋白表达系统富含二硫键蛋白的原核表达服务无细胞系统蛋白表达服务Marzf单一蛋白制备服务蛋白表达与纯化服务抗体&多肽文库重组蛋白产品杂交瘤细胞系稳定细胞系CAR-T载体抗体定制服务平台噬菌体展示平台抗体药物开发平台CAR-T平台蛋白表达与纯化平台大规模发酵服务平台基因测序平台
抗体人源化

抗体人源化

副标题

抗体人源化简介

抗体人源化改造是增加异源抗体中人源序列比率的过程。随着杂交瘤技术的发展,大批的与抗原有特异亲和力的异源(通常是鼠源)抗体引起了人们的兴趣,但是由于HAMA效应的存在,大大限制了这些抗体在临床上的应用。而且这些异源抗体往往半衰期短,且能引起机体的炎症效应。抗体人源化的过程就是解决异源单克隆抗体免疫原性,改善抗体对人体免疫系统的活化作用。

艾柏森生物拥有丰富的抗体人源化经验,我们利用多种策略进行抗体的人源化改造,可以在保留抗体特异性的同时,大部分或者全部消除异源抗体在人体内的免疫原性。其中包括重构抗体、链替换抗体及表面重塑抗体等,通过建立噬菌体展示的人源化突变库,筛选出高亲和力的人源化抗体,也可以通过哺乳动物细胞表面展示技术建立人源化的IgG库,通过FACS分类筛选。

艾柏森生物人源化服务基本流程:

抗体测序——同源建模——CDR移植——设计改造

服务流程:

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技术流程:

艾柏森生物提供多样化的策略,包括:

抗体人源化策略:CDR&SDR移植、链替换及人源IgG抗体库筛选;

抗体亲和力成熟策略包括:随机突变、定点突变等多种突变方式;

结合专有人类抗体数据库、电子建模等技术。

CDR移植抗体构建流程:

1.质控

对客户提供的亲本抗体做活性验证,确认是否有必要进行人源化改造。

2.抗体基因获得

提取杂交瘤细胞中mRNA,反转录为cDNA,PCR扩增VH和VL链,测序。

3.生物信息学方法设计人源化方案

3.1分析亲本抗体VH和VL序列,进行亚型分类、计算机模拟抗体结构分析及多序列比对进行CDR区和FR区定位,确定FR区保守氨基酸及关键氨基酸残基及其位置。

a. V区、CDR及FR序列的确定

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利用序列相似性搜索方法确定恒定区(CH和Cκ),然后找到序列引物,之间即为V区。将V区基因序列翻译为氨基酸序列,通过Kabat数据库和Swiss-Port数据库比较,确定CDR和二硫键位置。

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表: h-TNFα鼠单抗CDR和FR确定;*代表二硫键的Cys位置

b.抗体V区结构同源建模及抗原抗体复合物模型构建

(1)模板蛋白的选择

利用PDB数据库,搜索抗体V区同源蛋白,从而确定模板蛋白结构和序列,如下图。

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(2)SCR和Loop区的确定

利用Structure Superimpose法对模板蛋白进行结构相似性分析,确定模板蛋白的结构保守区(SCR)和无规则环区(Loop)。通过多序列比对,确定目的蛋白的SCR和Loop。

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(3)抗体VH和VL初始结构的获得

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(4)初始结构构象优化及分子动力学模拟

首先用Insight Ⅱ(2000)中Rotamer软件对模型构象的二面角调整,再用Discovery软件,在CVFF、Gromos力场下,经最陡下降、共轭梯度、牛顿力学等步骤对抗体V区构象进行优化。再通过动力学优化,获得稳定的空间构象。见图1。

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图:经过分子模拟、力学优化、动力学模拟获得抗体VH和VL碳原子空间构象

(5)抗体V区空间构象合理性判断

利用Ramachandran图对获得的抗体可变区构象进行评价,如下图所示,不同颜色代表了氨基酸残基构象的合理程度。红色代表残基构象匹配最佳,深黄色表示残基构象允许区,土黄色表示构象可以,白色表示构象存在较大误差。

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图 利用Ramachandran图对抗体的V区残基进行构象评估

(5)抗体可变区Fv构象的获得

选择同一个包含VH和VL的构象的模板为参考,考虑VH和VL相互作用模式,分析可及性表面是和表观静电分布情况,利用Molecular Docking的方法获得抗体V区构象。

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图3 抗体可变区的空间构象

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(6)抗原-抗体复合物模型的建立

抗原-抗体相互作用复合物结构是合理判定抗原表位、抗体合理改造与设计的基础。利用Molecular Docking方法,探讨抗原-抗体相互作用,确认二者相互识别过程中静电作用、氢键作用、疏水作用、范德华力作用等,预测二者的结合模式和亲和能力,从而进行抗原表位合理预测、抗体人源化和亲和力改造。

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图   利用分子对接方法建立抗原-抗体复合物结构模型

(7)抗体FR区中重要氨基酸残基的确定

利用SAS方程,计算可及性表面积;利用Delphi程序,计算表观静电分布。基于以下原则确定抗体FR区中重要氨基酸残基:

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3.2通过Kabat、Genebank和IMGT等数据库检索比对和辅助计算机分子模拟,寻找最大同源性的人FR区模板,设计CDR移植scFV,进行计算机结构模拟分析。

a. 人源抗体模板的选择及FR区保守氨基酸的确定

在NCBI网站,运行IgBLAST,通过BlastP程序,检索人源库中鼠抗体V区同源序列,通过序列比对归纳出人抗体FR中高频率出现的氨基酸残基及位置。

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b. 鼠源抗体人源化过程中需要改变的残基确定

根据可及表面积、表观静电分布及序列比对的结果,确定人源化过程中需要改变的氨基酸残基。

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c. 点突变的Fv空间结构模拟

利用计算机建模、力学优化及动力学模拟得到人源化抗体的V区构象,通过结构叠合进行亲本抗体和人源化抗体的构象比较。

d. 人源化后抗体活性预测

借助Molecular Docking和动力学模拟优化人源化后抗体-抗原复合物的结构,通过相互作用能、分子间氢键以及识别表位,从理论上评价异源抗体人源化后的生物学活性。

3.3表达重构抗体和亲本scFV抗体

根据计算机模拟设计的人源化方案,合成基因,表达48-126个重构抗体,分别测定其与抗原的相对结合活性。测定亲本scFV抗体亲和力,挑选亲和力最佳的人源化抗体克隆,进行亲和力成熟改造。


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相关服务:

★ 抗体人源化

★ 人源化牛超长CDR3抗体服务

★ 人源/人源化纳米抗体制备

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